- 友情链接
- ·北京市广安门医院 ·99健康网 ·39健康网 ·广东省人民医院 ·上海长征医院 ·中国医学科学院肿瘤医院 ·复旦大学附属肿瘤医院 ·天津市肿瘤医院 ·中山大学肿瘤防治中心 ·北京肿瘤医院 ·中国食用菌商务网
- 地址:地址:辽宁省鞍山市高新区红岭小区11栋1单元701号
- 电话:0412-5888462
- 传真:0412-5888723
- 手机:13304129650
- 联系人:崔澎
文献资料
珍稀药用真菌~~桑黄 第五章
浏览 :
3047
第五章 桑黄的人工栽培
目前,由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约,桑黄在自然界中形成子实体困难,造成天然的桑黄数量非常稀少,自然界中可供药用的资源有限,难以成为稳定的工业产品来源,对桑黄产业的发展十分不利,因此通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。
桑黄人工栽培极其困难,培养条件苛刻,且生长周期长达3.4年,但由于桑黄是一类白腐真菌,以腐生为主兼性寄生,因而对该菌进行人工培养在理论上是可行的。据报道,韩国已成功地培养出桑黄菌的子实体。现今,日本和韩国的桑黄栽培产业,已具相当规模;国内部分地方也了有了桑黄人工栽培成功的报道,但由于种种原因至今没有
相关的详细资料发布。天津市林业果树研究所食用菌研究中心长年从事食药用菌的研究工作,做了大量的摸索性试验,收获了人工栽培子实体桑黄。但由于技术尚不成熟,此方面的研究有待深入,以下内容仅供参考。
提前老化,甚至萎缩。 4-19
第二节 菌种生产的主要条件
一、温室
桑黄菌种生产和室内子实体培养一般需要温室,温室的构造应根据当地的情况,因地制宜。温室的温度控制方式有多种,一般有红外线加温法,红外灯加温法,电炉加温法,暖气加温法,有条件的还可以采用空调设备加温。
二、接种室
接种室是菌种接种的场所,要求严格地控制杂菌污染,既要有玻璃门窗通风,又要能够控制空气进入。接种室面积不宜过大,9平方米为宜。接种室内要求有水泥地面,石灰粉刷墙壁及上顶,室内装有紫外灯。接种室必要时还应有一个缓冲间,以减少空气直接进入接种室。
三、高压灭菌设备
可以根据培养量的大小自行选择。
四、其他设备及材料
超净工作台1个(图6)、玻璃瓶若干、酒精灯3盏、镊子2把、小口瓶2个、三角瓶2个、接种针各种形状2支、解剖刀l把、小剪刀1把、小称l把、温湿度计5个、天平l 台、试管若干、量杯2个、脱脂棉、纱布、酒精、高锰酸钾、升等。4-20
第三节 母种生产过程
一、培养基的配制及其灭菌
马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,琼脂20克,pH自然,维生素B1 1 0豪克,水1000毫升。
先将马铃薯洗净去皮,称取200克,切成小薄片,放入瓷缸中,加水l000毫升,加热煮沸,待马铃薯片软熟后,将澄清液倒人另一烧杯,弃掉马铃薯片,然后,将称好的琼脂,加人马铃薯澄清液中,加热熔化,待琼脂全部熔化后,再放人其他几种称量好的物质,不断搅拌,全部溶解后补充所蒸发的水分,稍加搅拌使之均匀,趁热分装试管,装量为试管长度的五分之一左右,装完后塞好棉塞,然后,扎成
捆,上端用报纸(内层)和硫酸纸(外层)包好。竖立放人高压灭菌锅内在1~1.2千克/平方厘米的压力下,灭菌30分钟,然后取出试管,待温度降至50℃一60℃时,摆成斜面冷凝备用。
在一般情况下,第一次使用高压灭菌锅时,应将冷却后的斜面试管抽取l/4,置放在27℃--30℃的恒温箱中,保温培养3天后检查,若未发现斜面长出任何细菌或真菌,则证明灭菌彻底,以后则不必每次抽取保温培养检查。高压灭菌锅在压力1.1千克/平方厘米时,锅内温度可达l 2 1℃,在这样高的温度下保持20~30分钟,完全可
以杀灭培养基或其他液体所带的细菌、真菌。有人不了解这一情况,随意加大灭菌锅压力和延长保压灭菌时间,会使培养基中营养成分遭到破坏,酸度增高,直至不能凝固。
灭菌好的斜面试管要尽快使用,一时用不完的可放在0℃--5℃的冰箱中保存一定时间,也可放在室温下保持一段时间。一般将试管放在20℃以上或30℃以下的恒温条件下培养5—7天,观察试管内培养基表面是否有异常现象出现,若有黄、绿、黑、青或黏液出现即是杂菌,证明灭菌未彻底,就不能使用,若没有其他异常现象就可使用。4-21
二、桑黄菌种的分离
1.子实体的消毒
先将新鲜的桑黄子实体表面用清水冲洗干净去掉泥沙和污物,用纱布擦于水分,后移到无菌室内,用0.1%的升汞液中浸泡3分钟,再用无菌水冲洗数次进行表面消毒。
2.组织分离
将消毒好的桑黄子实体用解剖刀从子实体中部纵切一刀,将中间部分切取一小块组织,迅速移接到斜面培养基上,加上棉塞,置恒温培养箱内,25 ℃--28 ℃培养,5天后可见组织块上长出绒毛状菌丝。经过7—1 0天的培养观察,菌丝已基本长满培养基表面,从中可选择菌丝生长快、生长健壮、旺盛的菌丝试管作为转管提纯使用。
3.转管提纯
经过分离出来的桑黄菌丝,都必须要经过2~3次的转管提纯,进一步观察菌丝生长变化情况以及菌丝的纯度情况和稳定性。选取优良旺盛的菌丝,去掉老化、退化、变化的菌丝。
桑黄菌丝生长情况有各种各样,若在琼脂培养基上表现生长缓慢、纤细、稀薄、弱乱,或者不长,甚至出现一凸一凹等症状。这类菌丝都不能使用,否则就会影响菌种质量,降低产量。所以为了提高菌种质量,必须从试管母种选育开始,选择菌丝生长旺盛、健壮的作为接种的母种使用。4-22
第四节 原种生产过程
原种是繁殖栽培中用的菌种,原种是由母种繁殖出来的。经过子实体组织分离获得的试管母种,生长再好也必须经过原种培养、观察、鉴定才能进一步作为扩大生产种的再生产,确定菌种的优良性和稳定性。
一、原种培养基
下面介绍几种原种培养基的不同配方,供参考选用。
1.木屑培养基
配方:锯木屑78%,石膏l%,麦麸20%,白糖l%。锯木屑一般采用阔叶树之类的锯木屑肩较好,其中以青岗树锯木屑为最好(松、柏、樟树和含芳香油的锯木屑不宜使用),要求新鲜,无霉变。
2.棉籽壳44%,木屑44%,麦麸l 0%,石膏粉1%,尿素0.5%:,过磷酸钙0.5%。
3.棉籽壳78%~79%,玉米粉20%,石膏粉1%~2%,含水量65%。
4.木屑73%,麸皮25%,糖1%,石膏粉1%。
制作过程:将上述原料配方混合均匀,白糖用清水溶化后,加人培养料中充分拌匀,再加清水,使培养料含水量达55%~65%之间.含水量过高.培养料不透气,菌丝生长缓慢或不长,含水量过低,培养料湿度不够,菌丝也难生长,并且各种营养成分的转化必须要有一定的湿度才能进行。
为了掌握好准确的含水量,最好边拌料,边喷水,边测定,以防用水过多。方法很简单,用手捏一把培养料,手指缝间见水不滴为宜(即含水量为65%)。4-23
二、灭菌
原种培养基灭菌可采用高压灭菌或常压灭菌两种方法。一般原料最好采用高压灭菌,由于它数量不多,质量要求较高,首先灭菌必须严格彻底。高压灭菌将原料放入高压锅内,上紧锅盖螺丝,加足水位,然后升火加温,待压力表指针上升到0.5磅(1磅=0.453592千克)时,即开始打开放气阀,排除锅内的冷空气,使压力表指针自动退回原位时即关闭(一般高压锅压力针上升到0.5磅时会自动排冷气,自动关闭),随后继续加温,使压力针上升到1.5磅时,保持1.5小时为宜,然后让它自动冷却后取出接种。
三、接种
桑黄接种可根据原种数量多少决定,数量多可采用接种室接种,数量少可采用接种箱接种。原种一般数量都不太多,最好用接种箱接,因为接种箱虽然操作困难,接种速度慢,但不易被杂菌感染,成活率高。
接种箱消毒,接种前预先将接种箱打扫干净,用75%的酒精或高锰酸钾溶液擦洗一遍,再把菌种瓶,及其他用具都擦洗一遍放人接种箱。消毒方法可采用两种方法同时进行。紫外灯照射、高锰酸钾和甲醛混合进行气化消毒30分钟接种。接种时,双手先用75%的酒精消毒后,再伸入接种箱,点燃酒精灯,把接种针放在火焰上烧红晾凉后使用。母种试管的棉塞表皮可在酒精火焰上烧一下,再拔掉棉塞,用接种钩把试管内的母种培养基挑取蚕豆大的一块,放在原种瓶内的培养基上,长有菌丝的那面培养基应朝上,有利于菌丝发育接触木屑培养基,接种后塞上棉塞,再进行第二瓶操作。每支试管母种可接原种5~8瓶。4-24
四、培养
接种后的原种放在25℃—28℃左右的恒温条件下培养5—7天后,就可看到培养基的表面白母种块上长出白色的绒毛菌丝,向培养基深部或四周扩散发展。此时应随时检查是否感染杂菌,若出现杂菌应及时淘汰,直到菌丝布满培养基表面为止。
原种接种后,在正常的温度下,一般在25天左右可长满瓶底,l 7—1 8天左右菌丝长到培养基的一半时,表面会出现子实体原基。作为原种的菌种不管子实体如何生长都不能拔掉瓶塞,以免杂菌进入瓶口内。
菌丝在生长过程中,因呼吸作用要散发一定的热量,往往瓶温高于室温或自然温度2℃~3℃,因此,菌种瓶在发菌时不宜堆叠过高或过挤,以免温度过高,而使菌种质量F降。
五、原种的保存
桑黄原种菌丝长满瓶后,应及时使用,不宜存放过久,在常温下可保存一个月左右,只要子实体未停止生长。没有枯干的都可作扩种使用,总之菌龄尽量缩短为好。原种的保存方法一般采用低温下避光保存较好,温度控制在5 ℃~7℃保存为宜,有条件的地方可用电冰箱保存。4-25
第五节 栽培种生产过程
栽培种是用原种扩制直接用于栽培的菌种。栽培种有两种制作方法,一种是锯木屑之类的菌种,另一种是木块菌种。锯木屑的菌种用于瓶栽和塑料袋栽比较适宜,木块菌种用于段木栽培,栽培种的选料和操作方法与原种制作基本相似。
一、木块、玉米芯培养基
由于桑黄的栽培基本采用段木栽培,因此,以下介绍木块栽培种的原料配方供参考。
木块、玉米芯培养基配方:木块l 000千克,过磷酸钙2千克,玉米芯]1 8千克,pH6‘.0~6.5,麦麸10千克,水适量,石膏2千克。这种培养基配方含糖量较高,不需另加白糖,以防偏酸,,后期子实体发育不良。具体操作:将原料按选择的配方比例混合均匀后,再加入用清水溶化的白糖拌匀,保持培养料含水量为65%。含水量的测定方法同原种测定相同,然后再用氢氧化钠或稀盐酸调至所需要的pH范围。
二、装瓶方法
把拌好的料装入瓶中,边装边将菌种瓶上下抖动,使培养料逐步紧实,但不能太紧。不能用其他东西将培养料往瓶内挤压以免造成松紧不匀,要求整个瓶中的培养料松紧适合,上下一致。一般来说培养料装得过松,菌丝生长快,但很稀、出现子实体迟;培养料过紧,菌丝生长慢,紧密,出现子实体原基较早。松紧不匀的培养料会加剧菌丝畸形生长。
培养料装至瓶口后,再用铁铲将培养基表面压平,用水洗去瓶壁内外黏附的培养基,塞上棉塞,进行高温灭菌。一般来说最好当天装的瓶当天就进行高温灭菌,因为培养料中有很多微生物不断地进行活动,不及时进行高温灭菌,其他杂菌就会繁殖,影响培养基的正常营养成分。4-26
三、灭菌方法
生产栽培种和原种灭菌一样,但是一般栽培种数量较大,高压灭菌锅装的数量少,最好采用土甑灭菌。土甑大小可根据生产量多少来决定,一般采用砖和水泥即可建成,土甑灭菌要求密封比较严密。土甑制作采用方形比圆形好,方形土甑便于放瓶子或袋子,一般宜深不宜浅。一立方密度的空间可装750克的瓶800个左右,塑料袋大约250袋左右,瓶子和塑料袋的放法都采角平放,竖放缝隙太大。不要在一个大甑内放几十瓶进行高温消毒,数量过少,甑内空隙过大,再加上土甑没有一定的高压装置,就不能达到彻底灭菌的目的。
灭菌时,从水煮沸起应保持足够的火力4~6小时,要求甑内空间温度达到I00。C以上,注意火力大小与时间长短结合安排。
无论采用高压灭菌或土法灭菌,灭菌压力不能过高或时间过长,压力过高或时闻过长会破坏营养基中的养分,使酸碱度下降,不利于桑黄菌丝生长。灭菌时间过短或温度过低,培养基中的杂菌以及其他微生物未杀死,将来就会繁殖,给生产带来严重损失。一定要掌握灭菌的温度压力和时间。
灭菌后,不要马上取出,最好在锅中闷一夜,第二天取出待瓶温下降到30。C后,再进行接种。4-27
四、接种
生产种接种数量大,采用接种箱接种速度太慢,最好采用接种室接种,接种室首先要求清洁迎生,空气不流动,这样有利于彻底消毒灭菌。
接种室消毒:在接种前一天,预先把接种室打扫干净,再用自来水把接种室的四周墙壁冲洗干净,使室内湿度增大,空气为静止状态。再用甲醛和高锰酸钾混合消毒,用药量按每立方米的空间需要甲醛l 0毫升、高锰酸钾5克计算。消毒时,应关闭门窗闷一天或一夜,第二天放人灭菌的瓶子、原种、用其等。放好后再进行药物消毒一次,同时可采用紫外灯照射半小时后接种。
接种工作准备:工作人员应在接种室外边的缓冲间预先换好接种衣,戴上口罩、乳胶手套、帽子等,再进入接种室接种。接种室接种操作比接种箱方便,速度较快。接种室空气条件差,氧气少,接种工作时间太长,对人体呼吸有影响,因此进入接种室一定要抓紧时间操作.
接种操作:先点燃酒精灯,再将原种瓶棉塞拔掉,把原种表面一层约l厘米厚的培养基表层去掉,再用接种钩挑取手指头大的l—2块迅速放在生产种培养基上,塞上棉塞。每瓶原种大约可接栽培种100瓶左右。接完后,打开门窗,将接种后的瓶子搬到培养室去培养。4-28
五、培养
栽培种在培养过程中,主要的工作是温度管理和杂菌观察。若是采用5~9月份的自然气温培养,就不需要人工加温或降温,若是当年9月份至第二年4月份生产,自然气温过低不能满足桑黄所需要的温度,就必须进行人工加温。桑黄菌丝虽然在3℃~4℃均能生长,但最好把温度控制在20℃~30℃左右,这样有利于菌丝的正常生长。
接种后的杂菌观察,一般桑黄菌丝开始萌发时杂菌也就开始生长。杂菌的生长原因由多种因素引起,有接种室
空间消毒不严,有操作时带进的杂菌,有高温灭菌不彻底的原因而造成杂菌感染,还有原种是否有杂菌感染等。这些原因都可以鉴别出来,若是高温灭菌不彻底,整个菌种培养基的杂菌是从瓶子中部或底部发生;若是原种本身有杂菌,接种后菌种培养料表面全是杂菌,但不会从瓶底部或中部发生杂菌;若是接种操作不当,只是部分瓶子表面滋生杂菌,这种情况不会全部感染杂菌。
还有另一种情况,接种后的种块既不长杂菌,又不萌发菌丝,这类情况要从多方面检查:菌种是否老化,接种温度是否过高,培养基酸碱度是否合适,培养温度是否正常,培养基营养成分是否符合要求,使用的原种是否可靠等,这些都会造成菌丝不萌发。
桑黄纯菌丝生长速度不快不慢、生长整齐均匀,纯白色,菌丝健壮,一般菌丝长到1/3时,培养基表面就会出现子实体原基,原基不断生长扩大。菌丝长到瓶底时,子实体可长到瓶口棉塞处,但不能让它长出棉塞,以免过多的分解培养基中的营养。一般从接种到菌丝生长结束大约需要25~30天左右,长满后,放在低温下妥善保存备用。4-29
第六节 桑黄的栽培过程
桑黄的栽培方式主要以段木栽培较为适宜。段木栽培一般适宜农村资源比较丰富的地方,现将段木栽培的方式介绍如下。
所谓段木栽培就是把树干或树枝切成段作为培养基来栽培。目前值得推行的是短木熟料栽培,产量的高低与段本种类,栽培技术等有关,子实体周期一般2~3年,经济效益十分明显。
一、工艺流程
4-30
二、树木的选择与切段、装袋
所选树木应以阔叶树之类树种为主,树木胸径大小以8~20厘米为宜。段木含水量以32%~42%为宜。每立方米段木可截伐直径1 0厘米、长l 5厘米的短段木850段左右。截段后用塑料袋包装严密。
三、灭菌、接种与菌丝体培养
以lOO ℃:常压灭菌,时间要求保持6--8小时。按每立方米段木50~80瓶接种室接种。在培养室温度为25℃~28 ℃的室内培养2个日左右。
四、脱袋与埋土
在培养期内,菌丝长好后即可脱袋。在埋土前要选挥排水良好、通风开阔的高地作为段木栽培的场所,并要做畦开沟、搭架遮阴。
五、培养与管理
菌丝生长阶段温度应控制在22℃。28℃,对于空气相对湿度和通风、光照则要求不严。子实体形成和分化阶段要求有适当的温度、湿度、光线和通气条件。温度要求在26℃左右,如温度持续在35 ℃以上或1 2℃以下,子实体很难分化或不分化。相对湿度应保持在85%。95%,光线以散射光为重,避免强日光直射。桑黄要求有良好的通气条件,对二氧化碳非常敏感。如果通气不良,会使子实体发育畸形。 5-1
六、桑黄的采收 .
当桑黄子实体由淡黄色变为黄棕色,菌盖边缘~圈嫩黄的颜色消失,开始革质化并有孢子散放时,即应及时采收。采收后的桑黄子实体可先在太阳下晾晒,然后在烘房内以50℃~60 ℃烘干。烘干时要加强通气,防止闷热而霉烂,使水分控制在1 2%左右为宜,烘干后的桑黄要及时装入防潮性能好的大塑料袋内密封贮藏,并要随时硷查防霉防蛀。
目前,由于受生理状态的特殊性和复杂性以及外部环境的制约,桑黄在自然界中形成子实体困难,造成天然的桑黄数量非常稀少,自然界中可供药用的资源有限,难以成为稳定的工业产品来源,对桑黄产业的发展十分不利,因此通过人工培植来弥补野生资源的不足显得尤为重要。
桑黄人工栽培极其困难,培养条件苛刻,且生长周期长达3.4年,但由于桑黄是一类白腐真菌,以腐生为主兼性寄生,因而对该菌进行人工培养在理论上是可行的。据报道,韩国已成功地培养出桑黄菌的子实体。现今,日本和韩国的桑黄栽培产业,已具相当规模;国内部分地方也了有了桑黄人工栽培成功的报道,但由于种种原因至今没有
相关的详细资料发布。天津市林业果树研究所食用菌研究中心长年从事食药用菌的研究工作,做了大量的摸索性试验,收获了人工栽培子实体桑黄。但由于技术尚不成熟,此方面的研究有待深入,以下内容仅供参考。
提前老化,甚至萎缩。 4-19
第二节 菌种生产的主要条件
一、温室
桑黄菌种生产和室内子实体培养一般需要温室,温室的构造应根据当地的情况,因地制宜。温室的温度控制方式有多种,一般有红外线加温法,红外灯加温法,电炉加温法,暖气加温法,有条件的还可以采用空调设备加温。
二、接种室
接种室是菌种接种的场所,要求严格地控制杂菌污染,既要有玻璃门窗通风,又要能够控制空气进入。接种室面积不宜过大,9平方米为宜。接种室内要求有水泥地面,石灰粉刷墙壁及上顶,室内装有紫外灯。接种室必要时还应有一个缓冲间,以减少空气直接进入接种室。
三、高压灭菌设备
可以根据培养量的大小自行选择。
四、其他设备及材料
超净工作台1个(图6)、玻璃瓶若干、酒精灯3盏、镊子2把、小口瓶2个、三角瓶2个、接种针各种形状2支、解剖刀l把、小剪刀1把、小称l把、温湿度计5个、天平l 台、试管若干、量杯2个、脱脂棉、纱布、酒精、高锰酸钾、升等。4-20
第三节 母种生产过程
一、培养基的配制及其灭菌
马铃薯(去皮)200克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,琼脂20克,pH自然,维生素B1 1 0豪克,水1000毫升。
先将马铃薯洗净去皮,称取200克,切成小薄片,放入瓷缸中,加水l000毫升,加热煮沸,待马铃薯片软熟后,将澄清液倒人另一烧杯,弃掉马铃薯片,然后,将称好的琼脂,加人马铃薯澄清液中,加热熔化,待琼脂全部熔化后,再放人其他几种称量好的物质,不断搅拌,全部溶解后补充所蒸发的水分,稍加搅拌使之均匀,趁热分装试管,装量为试管长度的五分之一左右,装完后塞好棉塞,然后,扎成
捆,上端用报纸(内层)和硫酸纸(外层)包好。竖立放人高压灭菌锅内在1~1.2千克/平方厘米的压力下,灭菌30分钟,然后取出试管,待温度降至50℃一60℃时,摆成斜面冷凝备用。
在一般情况下,第一次使用高压灭菌锅时,应将冷却后的斜面试管抽取l/4,置放在27℃--30℃的恒温箱中,保温培养3天后检查,若未发现斜面长出任何细菌或真菌,则证明灭菌彻底,以后则不必每次抽取保温培养检查。高压灭菌锅在压力1.1千克/平方厘米时,锅内温度可达l 2 1℃,在这样高的温度下保持20~30分钟,完全可
以杀灭培养基或其他液体所带的细菌、真菌。有人不了解这一情况,随意加大灭菌锅压力和延长保压灭菌时间,会使培养基中营养成分遭到破坏,酸度增高,直至不能凝固。
灭菌好的斜面试管要尽快使用,一时用不完的可放在0℃--5℃的冰箱中保存一定时间,也可放在室温下保持一段时间。一般将试管放在20℃以上或30℃以下的恒温条件下培养5—7天,观察试管内培养基表面是否有异常现象出现,若有黄、绿、黑、青或黏液出现即是杂菌,证明灭菌未彻底,就不能使用,若没有其他异常现象就可使用。4-21
二、桑黄菌种的分离
1.子实体的消毒
先将新鲜的桑黄子实体表面用清水冲洗干净去掉泥沙和污物,用纱布擦于水分,后移到无菌室内,用0.1%的升汞液中浸泡3分钟,再用无菌水冲洗数次进行表面消毒。
2.组织分离
将消毒好的桑黄子实体用解剖刀从子实体中部纵切一刀,将中间部分切取一小块组织,迅速移接到斜面培养基上,加上棉塞,置恒温培养箱内,25 ℃--28 ℃培养,5天后可见组织块上长出绒毛状菌丝。经过7—1 0天的培养观察,菌丝已基本长满培养基表面,从中可选择菌丝生长快、生长健壮、旺盛的菌丝试管作为转管提纯使用。
3.转管提纯
经过分离出来的桑黄菌丝,都必须要经过2~3次的转管提纯,进一步观察菌丝生长变化情况以及菌丝的纯度情况和稳定性。选取优良旺盛的菌丝,去掉老化、退化、变化的菌丝。
桑黄菌丝生长情况有各种各样,若在琼脂培养基上表现生长缓慢、纤细、稀薄、弱乱,或者不长,甚至出现一凸一凹等症状。这类菌丝都不能使用,否则就会影响菌种质量,降低产量。所以为了提高菌种质量,必须从试管母种选育开始,选择菌丝生长旺盛、健壮的作为接种的母种使用。4-22
第四节 原种生产过程
原种是繁殖栽培中用的菌种,原种是由母种繁殖出来的。经过子实体组织分离获得的试管母种,生长再好也必须经过原种培养、观察、鉴定才能进一步作为扩大生产种的再生产,确定菌种的优良性和稳定性。
一、原种培养基
下面介绍几种原种培养基的不同配方,供参考选用。
1.木屑培养基
配方:锯木屑78%,石膏l%,麦麸20%,白糖l%。锯木屑一般采用阔叶树之类的锯木屑肩较好,其中以青岗树锯木屑为最好(松、柏、樟树和含芳香油的锯木屑不宜使用),要求新鲜,无霉变。
2.棉籽壳44%,木屑44%,麦麸l 0%,石膏粉1%,尿素0.5%:,过磷酸钙0.5%。
3.棉籽壳78%~79%,玉米粉20%,石膏粉1%~2%,含水量65%。
4.木屑73%,麸皮25%,糖1%,石膏粉1%。
制作过程:将上述原料配方混合均匀,白糖用清水溶化后,加人培养料中充分拌匀,再加清水,使培养料含水量达55%~65%之间.含水量过高.培养料不透气,菌丝生长缓慢或不长,含水量过低,培养料湿度不够,菌丝也难生长,并且各种营养成分的转化必须要有一定的湿度才能进行。
为了掌握好准确的含水量,最好边拌料,边喷水,边测定,以防用水过多。方法很简单,用手捏一把培养料,手指缝间见水不滴为宜(即含水量为65%)。4-23
二、灭菌
原种培养基灭菌可采用高压灭菌或常压灭菌两种方法。一般原料最好采用高压灭菌,由于它数量不多,质量要求较高,首先灭菌必须严格彻底。高压灭菌将原料放入高压锅内,上紧锅盖螺丝,加足水位,然后升火加温,待压力表指针上升到0.5磅(1磅=0.453592千克)时,即开始打开放气阀,排除锅内的冷空气,使压力表指针自动退回原位时即关闭(一般高压锅压力针上升到0.5磅时会自动排冷气,自动关闭),随后继续加温,使压力针上升到1.5磅时,保持1.5小时为宜,然后让它自动冷却后取出接种。
三、接种
桑黄接种可根据原种数量多少决定,数量多可采用接种室接种,数量少可采用接种箱接种。原种一般数量都不太多,最好用接种箱接,因为接种箱虽然操作困难,接种速度慢,但不易被杂菌感染,成活率高。
接种箱消毒,接种前预先将接种箱打扫干净,用75%的酒精或高锰酸钾溶液擦洗一遍,再把菌种瓶,及其他用具都擦洗一遍放人接种箱。消毒方法可采用两种方法同时进行。紫外灯照射、高锰酸钾和甲醛混合进行气化消毒30分钟接种。接种时,双手先用75%的酒精消毒后,再伸入接种箱,点燃酒精灯,把接种针放在火焰上烧红晾凉后使用。母种试管的棉塞表皮可在酒精火焰上烧一下,再拔掉棉塞,用接种钩把试管内的母种培养基挑取蚕豆大的一块,放在原种瓶内的培养基上,长有菌丝的那面培养基应朝上,有利于菌丝发育接触木屑培养基,接种后塞上棉塞,再进行第二瓶操作。每支试管母种可接原种5~8瓶。4-24
四、培养
接种后的原种放在25℃—28℃左右的恒温条件下培养5—7天后,就可看到培养基的表面白母种块上长出白色的绒毛菌丝,向培养基深部或四周扩散发展。此时应随时检查是否感染杂菌,若出现杂菌应及时淘汰,直到菌丝布满培养基表面为止。
原种接种后,在正常的温度下,一般在25天左右可长满瓶底,l 7—1 8天左右菌丝长到培养基的一半时,表面会出现子实体原基。作为原种的菌种不管子实体如何生长都不能拔掉瓶塞,以免杂菌进入瓶口内。
菌丝在生长过程中,因呼吸作用要散发一定的热量,往往瓶温高于室温或自然温度2℃~3℃,因此,菌种瓶在发菌时不宜堆叠过高或过挤,以免温度过高,而使菌种质量F降。
五、原种的保存
桑黄原种菌丝长满瓶后,应及时使用,不宜存放过久,在常温下可保存一个月左右,只要子实体未停止生长。没有枯干的都可作扩种使用,总之菌龄尽量缩短为好。原种的保存方法一般采用低温下避光保存较好,温度控制在5 ℃~7℃保存为宜,有条件的地方可用电冰箱保存。4-25
第五节 栽培种生产过程
栽培种是用原种扩制直接用于栽培的菌种。栽培种有两种制作方法,一种是锯木屑之类的菌种,另一种是木块菌种。锯木屑的菌种用于瓶栽和塑料袋栽比较适宜,木块菌种用于段木栽培,栽培种的选料和操作方法与原种制作基本相似。
一、木块、玉米芯培养基
由于桑黄的栽培基本采用段木栽培,因此,以下介绍木块栽培种的原料配方供参考。
木块、玉米芯培养基配方:木块l 000千克,过磷酸钙2千克,玉米芯]1 8千克,pH6‘.0~6.5,麦麸10千克,水适量,石膏2千克。这种培养基配方含糖量较高,不需另加白糖,以防偏酸,,后期子实体发育不良。具体操作:将原料按选择的配方比例混合均匀后,再加入用清水溶化的白糖拌匀,保持培养料含水量为65%。含水量的测定方法同原种测定相同,然后再用氢氧化钠或稀盐酸调至所需要的pH范围。
二、装瓶方法
把拌好的料装入瓶中,边装边将菌种瓶上下抖动,使培养料逐步紧实,但不能太紧。不能用其他东西将培养料往瓶内挤压以免造成松紧不匀,要求整个瓶中的培养料松紧适合,上下一致。一般来说培养料装得过松,菌丝生长快,但很稀、出现子实体迟;培养料过紧,菌丝生长慢,紧密,出现子实体原基较早。松紧不匀的培养料会加剧菌丝畸形生长。
培养料装至瓶口后,再用铁铲将培养基表面压平,用水洗去瓶壁内外黏附的培养基,塞上棉塞,进行高温灭菌。一般来说最好当天装的瓶当天就进行高温灭菌,因为培养料中有很多微生物不断地进行活动,不及时进行高温灭菌,其他杂菌就会繁殖,影响培养基的正常营养成分。4-26
三、灭菌方法
生产栽培种和原种灭菌一样,但是一般栽培种数量较大,高压灭菌锅装的数量少,最好采用土甑灭菌。土甑大小可根据生产量多少来决定,一般采用砖和水泥即可建成,土甑灭菌要求密封比较严密。土甑制作采用方形比圆形好,方形土甑便于放瓶子或袋子,一般宜深不宜浅。一立方密度的空间可装750克的瓶800个左右,塑料袋大约250袋左右,瓶子和塑料袋的放法都采角平放,竖放缝隙太大。不要在一个大甑内放几十瓶进行高温消毒,数量过少,甑内空隙过大,再加上土甑没有一定的高压装置,就不能达到彻底灭菌的目的。
灭菌时,从水煮沸起应保持足够的火力4~6小时,要求甑内空间温度达到I00。C以上,注意火力大小与时间长短结合安排。
无论采用高压灭菌或土法灭菌,灭菌压力不能过高或时间过长,压力过高或时闻过长会破坏营养基中的养分,使酸碱度下降,不利于桑黄菌丝生长。灭菌时间过短或温度过低,培养基中的杂菌以及其他微生物未杀死,将来就会繁殖,给生产带来严重损失。一定要掌握灭菌的温度压力和时间。
灭菌后,不要马上取出,最好在锅中闷一夜,第二天取出待瓶温下降到30。C后,再进行接种。4-27
四、接种
生产种接种数量大,采用接种箱接种速度太慢,最好采用接种室接种,接种室首先要求清洁迎生,空气不流动,这样有利于彻底消毒灭菌。
接种室消毒:在接种前一天,预先把接种室打扫干净,再用自来水把接种室的四周墙壁冲洗干净,使室内湿度增大,空气为静止状态。再用甲醛和高锰酸钾混合消毒,用药量按每立方米的空间需要甲醛l 0毫升、高锰酸钾5克计算。消毒时,应关闭门窗闷一天或一夜,第二天放人灭菌的瓶子、原种、用其等。放好后再进行药物消毒一次,同时可采用紫外灯照射半小时后接种。
接种工作准备:工作人员应在接种室外边的缓冲间预先换好接种衣,戴上口罩、乳胶手套、帽子等,再进入接种室接种。接种室接种操作比接种箱方便,速度较快。接种室空气条件差,氧气少,接种工作时间太长,对人体呼吸有影响,因此进入接种室一定要抓紧时间操作.
接种操作:先点燃酒精灯,再将原种瓶棉塞拔掉,把原种表面一层约l厘米厚的培养基表层去掉,再用接种钩挑取手指头大的l—2块迅速放在生产种培养基上,塞上棉塞。每瓶原种大约可接栽培种100瓶左右。接完后,打开门窗,将接种后的瓶子搬到培养室去培养。4-28
五、培养
栽培种在培养过程中,主要的工作是温度管理和杂菌观察。若是采用5~9月份的自然气温培养,就不需要人工加温或降温,若是当年9月份至第二年4月份生产,自然气温过低不能满足桑黄所需要的温度,就必须进行人工加温。桑黄菌丝虽然在3℃~4℃均能生长,但最好把温度控制在20℃~30℃左右,这样有利于菌丝的正常生长。
接种后的杂菌观察,一般桑黄菌丝开始萌发时杂菌也就开始生长。杂菌的生长原因由多种因素引起,有接种室
空间消毒不严,有操作时带进的杂菌,有高温灭菌不彻底的原因而造成杂菌感染,还有原种是否有杂菌感染等。这些原因都可以鉴别出来,若是高温灭菌不彻底,整个菌种培养基的杂菌是从瓶子中部或底部发生;若是原种本身有杂菌,接种后菌种培养料表面全是杂菌,但不会从瓶底部或中部发生杂菌;若是接种操作不当,只是部分瓶子表面滋生杂菌,这种情况不会全部感染杂菌。
还有另一种情况,接种后的种块既不长杂菌,又不萌发菌丝,这类情况要从多方面检查:菌种是否老化,接种温度是否过高,培养基酸碱度是否合适,培养温度是否正常,培养基营养成分是否符合要求,使用的原种是否可靠等,这些都会造成菌丝不萌发。
桑黄纯菌丝生长速度不快不慢、生长整齐均匀,纯白色,菌丝健壮,一般菌丝长到1/3时,培养基表面就会出现子实体原基,原基不断生长扩大。菌丝长到瓶底时,子实体可长到瓶口棉塞处,但不能让它长出棉塞,以免过多的分解培养基中的营养。一般从接种到菌丝生长结束大约需要25~30天左右,长满后,放在低温下妥善保存备用。4-29
第六节 桑黄的栽培过程
桑黄的栽培方式主要以段木栽培较为适宜。段木栽培一般适宜农村资源比较丰富的地方,现将段木栽培的方式介绍如下。
所谓段木栽培就是把树干或树枝切成段作为培养基来栽培。目前值得推行的是短木熟料栽培,产量的高低与段本种类,栽培技术等有关,子实体周期一般2~3年,经济效益十分明显。
一、工艺流程
4-30
二、树木的选择与切段、装袋
所选树木应以阔叶树之类树种为主,树木胸径大小以8~20厘米为宜。段木含水量以32%~42%为宜。每立方米段木可截伐直径1 0厘米、长l 5厘米的短段木850段左右。截段后用塑料袋包装严密。
三、灭菌、接种与菌丝体培养
以lOO ℃:常压灭菌,时间要求保持6--8小时。按每立方米段木50~80瓶接种室接种。在培养室温度为25℃~28 ℃的室内培养2个日左右。
四、脱袋与埋土
在培养期内,菌丝长好后即可脱袋。在埋土前要选挥排水良好、通风开阔的高地作为段木栽培的场所,并要做畦开沟、搭架遮阴。
五、培养与管理
菌丝生长阶段温度应控制在22℃。28℃,对于空气相对湿度和通风、光照则要求不严。子实体形成和分化阶段要求有适当的温度、湿度、光线和通气条件。温度要求在26℃左右,如温度持续在35 ℃以上或1 2℃以下,子实体很难分化或不分化。相对湿度应保持在85%。95%,光线以散射光为重,避免强日光直射。桑黄要求有良好的通气条件,对二氧化碳非常敏感。如果通气不良,会使子实体发育畸形。 5-1
六、桑黄的采收 .
当桑黄子实体由淡黄色变为黄棕色,菌盖边缘~圈嫩黄的颜色消失,开始革质化并有孢子散放时,即应及时采收。采收后的桑黄子实体可先在太阳下晾晒,然后在烘房内以50℃~60 ℃烘干。烘干时要加强通气,防止闷热而霉烂,使水分控制在1 2%左右为宜,烘干后的桑黄要及时装入防潮性能好的大塑料袋内密封贮藏,并要随时硷查防霉防蛀。